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你知道电泳缓冲液的特点是什么?有何作用嘛?

444 人阅读发布时间:2022-11-21 13:03

电泳缓冲液是核酸、蛋白质凝胶电泳系统的一个重要组成, 是电泳场中的导体,也是维持电泳系统恒定 pH 值的必要条件。其成分及其离子强度影 响物质的电泳迁移率,应避免与被分离的样 品发生化学反应而改变样品的理化性质或使 其丧失生物活性。电泳缓冲液中的 EDTA 可螯合 Mg 离子等二价阳离子,防止电泳时激 活 DNA 酶及 Mg 离子与核酸生成沉淀。

电泳缓冲液是核酸、蛋白质凝胶电泳系统的一个重要组成,  是电泳场中的导体,也是维持电泳系统恒定  pH 值的必要条件。常见的核酸电泳缓冲液有:TAE、TBE、TPE 和 MOPS 等。

电泳缓冲液的特点:

1.TAE 是使用广泛的缓冲系统。其特点是超螺旋在其中电泳时更符合实际相对分子质量 (TBE 中电泳时测出的相对分子质量会大于实际分子质量),且双链线状 DNA 在其中的迁移率较其他两种缓冲液快约 10%,电泳大于 13kb 的片段时用 TAE 缓冲液将取得更好的分离效果,此外,回收 DNA 片段时也易用 TAE 缓冲系统进行电泳。TAE 的缺点是缓冲容量小,长时间电泳 (如过夜) 不可选用,除非有循环装置使两极的缓冲液得到交换。

2.TBE 的特点是缓冲能力强,长时间电泳时可选用 TBE,并且当用于电泳小于 1kb 的片段时分离效果更好。TBE 用于琼脂糖凝胶时易造成高电渗作用,并且因与琼脂糖相互作用生成非共价结合的四羟基硼/酸盐复合物而使 DNA 片段的回收率降低,所以不宜在回收电泳中使用。

3.TPE 的缓冲能力也较强,但由于磷酸盐易在乙醇沉淀过程中析出,所以也不宜在回收 DNA 片段的电泳中使用。

电泳缓冲液的作用:

1. 缓冲液在电泳过程中的一个作用是维持合适的 pH。电泳时阳极与阴极都会发生电解反应,阳极发生的是氧化反应 (4OH--4e->2 H2O+O2),阴极发生的是还原反应 (4 H++4e->2 H2),长时间的电泳将使阳极变酸,阴极变碱。一个好的缓冲系统应有较强的缓冲能力,使溶液两极的 pH 保持基本不变。

2. 电泳缓冲液的另一个作用是使溶液具有一定的导电性,以利于 DNA 分子的迁移,例如,一般电泳缓冲液中应含有 0.01-0.04mol/L 的 Na+离子,Na+离子的浓度太低时电泳速度变慢; 太高时就会造成过大的电流使胶发热甚至熔化。

3. 电泳缓冲液还有一个组分是 EDTA,加入浓度为 1-2 mmol/L,目的是螯合 Mg2+ 等离子,防止电泳时激活  DNA 酶,此外还可防止 Mg2+离子与核酸生成沉淀。

 
 
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