- 移动端
江苏麦格生物科技有限公司
5 年
手机商铺
- NaN
- 0
- 0
- 2
- 2
推荐产品
公司新闻/正文
干货！OCT 冰冻切片包埋剂产品使用步骤及注意事项
2560 人阅读发布时间：2024-09-14 15:39
- 准备组织样本：将需要研究的组织样本取出，并在无菌条件下进行处理和固定，例如使用缓冲 formalin 进行固定。
- 制备 OCT 包埋剂：将 OCT 包埋剂从 -20℃ 冷藏中取出，并在常温下静置 15-30 分钟，使其恢复至室温。
- 冷冻组织样本：将固定好的组织样本迅速转移到 OCT 包埋剂中，尽量避免产生气泡。然后，将样本与 OCT 包埋剂一起干燥冰盐混合物中，使其迅速冷冻。
- 包埋组织样本：待样本冷冻后，将其从冰盐混合物中取出，迅速安置到预先准备好的组织包埋模具中，确保样本位置正确、不断口和方向一致。
- 再次冷冻：将组织样本再次放回到干燥冰盐混合物中，并迅速冷冻至 -70℃ 左右。
- 切割样本：使用特制的微型切片机将已经包埋的组织样本进行切割，厚度可根据需要进行调整。
- 保存样本：将切割好的样本用无菌保存介质（例如PBS）冲洗后，置于 -80℃ 或液氮中保存。
注意事项：使用 OCT 冰冻切片包埋剂的关键在于维持冷室、组织块、包埋剂以及切片刀之间的温度平衡，以及了解并调整至适合固定组织类型的 OCT，以获取高质量的冰冻切片。此外，不同的组织类型因其构造和脂质含量的不同，其切割温度也有所不同，因此选择合适的包埋剂和调整切割温度是确保切片质量的重要因素。
冰冻切片样本制备
冰冻切片的样本制备较为简单。
方式一：尽量选用新鲜组织，用生理盐水清洗掉表面血水，将组织修剪到一定大小，用吸水纸吸干表面水分（防止水分在速冻过程中形成冰晶），直接进行后续包埋。
方式二：选取新鲜组织，修整到一定大小，至于多聚甲醛中低温固定 18-24h，再经过 30% 的蔗糖沉降脱水（或者梯度脱水，15% 蔗糖中脱水至沉底，再转到 30% 蔗糖中沉底），再经过 OCT 的包埋。
包埋：提前准备泡沫箱，倒入一定量的液氮，在包埋磨具中加入少量 OCT 覆盖磨具底部（避免产生气泡，若产生气泡可用注射器或者枪头吸弃），将组织至于 OCT 包埋剂中，调整组织位置，加入 OCT 包埋剂完全覆盖组织（避免产生气泡），用镊子夹住磨具，至于液氮上方，大概 10-20s 后，组织就会迅速的冰结成块，若不能及时切片，用锡纸包裹，做好标记，至于 -80℃ 冰箱内保存。
许多老师纠结于方案一和方案二的选择，这里给到的建议是，如果是手术中的快速诊断，简单的 HE 染色，可以用方案一，结果快，但是在追求速度的同时，极大的降低了灵敏度，科研实验或者做多重荧光免疫组化，推荐使用方案二，为的是保证染色时能精确定位，提高特异度和灵敏度。
切片制作
1、切片前调整冷冻切片机温度在 -25℃~-18℃；
2、在标本拖上涂适量包埋剂，将冷冻包埋好的样本取出，至于标本拖上冷冻固定；
3、将样本拖至于冷冻切片机的机头上，调整位置；
4、调整切片厚度进行修片（修片时厚度可以大一些），修整标本至组织块暴露。用毛笔将操作区清扫干净；
5、重新调整切片厚度，进行正式切片，切下的组织片在防卷板下方平铺，可用毛笔辅助组织片平整，用防脱载玻片平稳吸附切片。
包埋流程
OCT 包埋剂（SAKURA产品，MADE IN USA）
1. 将放在蔗糖溶液中的组织块取出，放入 20g L-1 蔗糖与 OCT 包埋剂1：1体积比例混合液中，室温浸泡2h
2. 移入 OCT 包埋剂中室温浸泡 4h，更换新的 OCT 包埋剂，室温浸泡 6h.
3. 将标本置于托物台，用恒冷箱切片机切片（一般- 22℃），片厚 10μm，贴于预处理的载玻片上，-20℃ 冰箱保存。
OCT 包埋剂的应用
与石蜡组织相比，冷冻切片的简便快捷使其在临床组织学诊断中应用广泛，特别适用于脂肪组织、神经组织、髓鞘，以及肌肉的活检染色。
OCT 包埋剂是一种聚乙二醇和聚 Ethylene 醇的水溶性混合物，英文全称：optimal cutting temperature compound，已广泛用于免疫组化实验室中，其用途是在冰冻切片时支撑组织，以增加组织的连续性，减少皱折及碎裂。又因 OCT 混合物为水溶性，故在漂片时可溶于水，所以在以后的染色中不会增加背景染色。 利用 OCT 混合物（optimal cutting temperature compound）预先浸润组织，然后再进行恒冷箱切片，使切片质量得到改善。
麦格生物 OCT 冷冻切片包埋剂产品特点：
液面清晰可见，易于使用
品质优良，粘稠度高
便捷瓶口设计
染色前在载玻片上易于溶解
粘度高，确保组织与固定器有很强的黏附性，在溶剂为液体的情况下，可以适当移动标本的固定方向
冻结迅速，使晶体形成的伤害最小
可作为浸润性溶剂，用于切割容易破裂的组织，如大脑等
