使用细胞分离液的注意事项

使用细胞分离液的注意事项

一、分离方法会影响胰岛的产率和存活率，因此，取材时需要注意：
1.胰脏应快速取材，保持包膜完整。
2.建议采用UW溶液运输。
3.对胰脏进行评估，在消化酶灌注前去除多余的脂肪和残留的十二指肠和脾脏。
4.消化过程不宜进行震荡，以保证胰腺组织被灌注的消化酶液消化，而不是被胰腺所释放的胰蛋白酶消化。
5.要保证胰岛的包膜完整，消化不能太充分。宁可不足，也不可过头，否则会影响胰岛纯化的产率。

二、分离胰岛细胞时的注意事项：
1. biocoll分离液使用时，是采用连续密度梯度，需要分别配制密度为1.065g/mL（UW溶液与Biocoll混合）和密度为1.095 g/mL（UW溶液与Biocoll混合）的溶液，二者再混合。
2. 分离时离心1800rpm，可考虑离心10分钟，之后使COBE细胞分离机保持4℃，防止酶激活导致结构完整性破坏。
3. 胰岛在最轻密度层，随着密度增加，也会有部分胰岛，但外分泌组织也会增多。

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