Cytoplasmic Membrane Staining Kit with DiI (Red Fluorescence)

细胞膜红色荧光染色试剂盒(DiI)

产品简介：

DiI 即 DiIC18(3)是最常用的细胞膜荧光探针之一，呈现橙红色荧光。DiI 是一种亲脂性羰花青

(carbocyanine)染料，进入细胞膜后可以侧向扩散逐渐使整个细胞的细胞膜被染色。DiI 毒性很低，通常 不会影响细胞的生存力。DiI 在进入细胞膜之前荧光非常弱，仅当进入到细胞膜后才可以被激发出很强 的荧光。DiI 被激发后可以发出橙红色的荧光，DiI 和磷酯双层膜结合后最大激发波长为 549nm ，最大 发射波长为 565nm。

本试剂盒可以直接染色活的细胞或组织，染色时间通常为 5-20 分钟。对于固定的细胞或组织，通 常宜使用配制在 PBS 中的 4%多聚甲醛进行固定，使用其它不适当的固定液会导致荧光背景较高。本  试剂盒如果用于流式细胞仪，每个样品的检测体系体积为 0.5ml 时，可以进行 200 次检测，96 孔板每 孔检测体系的体积为 100ul 时，可以进行 1000 次检测。

 

使用方法（仅供参考）：

一、工作液的配制：

1 ．染色工作液的用量：对于 6、12、24、96 孔板，每孔的细胞膜染色工作液分别为 1~2ml、0.5~ 1ml、 300~500μl 和 50~ 100μl；对于切片，可以根据切片大小，每个切片使用 100-200μl 的细胞膜染色工作液。

2 ．染色工作液的配制：根据样品数量和每个样品所需工作液的体积，计算出染色工作液的总体积。 以流式细胞仪检测为例，每个样品的细胞膜染色工作液为 0.5ml ，参照下表配制细胞膜染色工作液。

注：请严格按照表中组分顺序和体积配制细胞膜染色工作液。对于活细胞染色，如细胞对于培养条件非常敏感， 可使用细胞培养液代替染色缓冲液，但可能会导致染色效果有所下降，需要适当考虑延长染色时间或加大 DiI 染料浓度。

二、贴壁细胞的染色：

1 ．吸除细胞膜染色工作液，用 Hanks' Balanced Salt Solution 或 PBS 洗涤 2-3 次，然后加入 37ºC 预热的细胞培养液即可在荧光显微镜下观察。

2 ．将贴壁细胞种于细胞培养皿、多孔细胞培养板或者细胞爬片上。

3 ．吸除培养液，缓冲液清洗 2-3 次。

4 ．加入适当体积的染色工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。

5 ．37℃避光孵育 5～20 min ，不同的细胞最佳培养时间不同。可以 5min 作为起始孵育时间，之后 优化体系以得到均一的标记结果。

6 ．吸除染色工作液，缓冲液清洗 2～3 次。

7 ．加入 37ºC 预热的培养基，即可荧光显微镜下观察。

三、悬浮细胞的染色：

1 ．加入适当体积的染色工作液重悬细胞，使其密度为 1-2 × 106/mL。

2 ．37℃避光孵育细胞 5～20 min ，不同的细胞最佳培养时间不同。可以 5 min 作为起始孵育时间， 之后优化体系以得到均一的标记结果。

3 ．孵育结束，500- 1000×g 室温离心 5 min。

4 ．吸除上清液，再次缓慢加入 37ºC 预热的细胞培养液重悬细胞。

5 ．重复 3,4 步骤两次以上。

6 ．流式细胞仪检测，或将细胞转移至多孔板、细胞培养皿或者细胞爬片上，在荧光显微镜下观察。

四、染色后的固定和通透：

1 ．固定：如果样品需要进一步进行免疫荧光实验，建议使用 4%多聚甲醛固定液进行固定。

2 ．通透：建议使用 0. 1% Triton X- 100 或洋地黄皂苷进行通透。但通透可能会影响 DiI 在细胞膜的 定位并会增加细胞内的染色，具体实验中需根据实验的需求选择合适的细胞通透液。

注：如果需要封片，建议直接用 PBS 进行封片。请避免使用含有甘油或其它有机物的封片剂，否则会影响

染色并 增加荧光背景。

五、固定后细胞或切片的染色：

1 ．使用 4%多聚甲醛固定液进行固定。

2 ．吸除固定液，用 PBS 洗涤细胞 3 遍。

选做：使用配制在 PBS 中的 0.1% Triton X-100 进行通透，室温 10min 。然后用 PBS 洗涤细胞 3 遍。

选做：按照免疫染色的方法进行抗体的孵育或用其它染料进行染色。抗体孵育步骤中的封闭液、抗体稀释液及洗 涤液不能含有去垢剂。

3 ．加入适当体积的染色工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞或样品。

4 ．37ºC 避光孵育 5-20min ，不同的细胞最佳培养时间不同。可以 5 min 作为起始孵育时间，之后 优化体系以得到均一的标记结果。

5 ．吸除细胞膜染色工作液，用 PBS 洗涤 2-3 次，随后即可在荧光显微镜下观察。

注意事项：

1 、不同细胞的最佳染色浓度略有不同，细胞膜染色工作液的最终浓度建议根据不同细胞系和实验

体系进行优化，可在 1:100- 1:400 之间进行调整。DiI 的最终浓度提高时，染色增强剂的用量不变。

2 、如果染色时间过长或染色后细胞继续培养，探针也可能进入细胞内而染色其它细胞器的膜。

3 、染色缓冲液经过过滤除菌处理，在使用时须注意避免微生物污染，否则很可能严重影响染色效

果。如果染色缓冲液发生浑浊等明显的微生物污染，就不能继续使用。

4 、荧光染料不可避免的都存在一定的淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

5 、本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。 6 、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

保存条件：

-20℃避光保存，一年有效，避免反复冻融。染色增强剂(400X)和染色缓冲液也可保存在 4ºC。

产品编号	名称	包装	品牌
MH1063	细胞膜红色荧光染色试剂盒(DiI)	1盒	麦格
MH1061	细胞膜绿色荧光染色试剂盒(DiO)	1盒	麦格

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